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技術文章

青蒿素與菌液測定的前世今生

更新日期:2019年7月1日 大字 小字


前言


由屠呦呦團隊深度開發的青蒿素研究,在最近有了新的進展-通過增加用藥周期和聯合用藥解決瘧原蟲對其耐藥性[1]。而青蒿素也面臨著價格昂貴及供應不足的難題,研究者利用菌體構建合成青蒿素的前體的研究[2]能夠提供參考思路。




   

菌體的生長情況可用OD600初步判斷菌落生長情況并間接測定菌落的密度,



是因為某特定波長下,菌懸液的細胞濃度僅在一定的范圍內與對應的吸光度值呈正比關系,不同的是,針對非球狀的放線菌和某些霉菌等以及培養基中有其他渾濁物質則不能通過該方法推斷濃度。



如果菌液OD600在0.6-0.8之間,表明細菌處于旺盛生長的對數生長期細胞生長,OD600>3表明細菌已經飽和等,這些僅僅是粗略估計菌落的生長情況。



想要知道較為精確的菌落濃度,需要將制備好的菌懸液梯度稀釋后,以未加菌液的培養基做空白對照,使用分光光度計分別測定OD600;并用平板計數法計算菌落總數。繪制標準曲線,來推算未知濃度菌液的生長狀態。



若某一菌液的OD值為負,可能是細菌與培養基發生變色反應,顏色的改變影響吸光度數值。菌液在測定前保持懸浮狀態能夠保證測定的準確性。



由于600nm處對濁度的敏感度最高,常用600nm為檢測波長,也可以對菌液進行全波長掃描,在其最大吸收峰波長下進行測定。


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小寶出品的 Micro Drop 超微量分光光度計可檢測OD600,雙上樣方式全波長掃描,



光程可自動調節:最小檢測光程0.05mm,高濃度樣本可不用稀釋直接測量



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[1] Wang J, Xu C, Liao F L, et al. A Temporizing Solution to “Artemisinin Resistance”[J]. New England Journal of Medicine, 2019.

[2]吳濤, 吳勝明, 殷晴, 等. 在大腸桿菌內引入甲羥戊酸途徑高效合成抗瘧藥青蒿素前體——紫穗槐-4,11-二烯[J]. 生物工程學報, 2011, 27(7).

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